Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的步骤中逐渐扩展

从第一次注意到人体内自身抗形体到注意到1型号冠心病医学疼痛的十分困难率在婴幼儿时期就有很好的描绘出，多个人体内自身抗形体阴性的婴幼儿之中亦有70%在抗体转换后10年内患上冠心病，而随访15年的婴幼儿这一数目增高到84%。相比之下之下，占多数医学1型号冠心病一半以上的型号1型号冠心病的发病机制还并未想得到充分的研究。

愈发多的人开始用于分期系统来定义1型号冠心病的十分困难：个形体在注意到多种人体内自身抗形体时进入第1先决条件，注意到浓度诱发时进入第2先决条件，注意到疼痛时进入第3先决条件。一些多发人体内自身抗形体阴性的个形体，在1期和2期，十分困难较慢，并发展为发病的1型号冠心病。我们之前描绘出了一第三组在首次检验到多种人体内自身抗形体样本后多于10年无冠心病的短时间十分困难者，这第三组病征人数少，但相似性极其指明。随后，我们断定人体内自身抗原免疫CD8+T细胞核催化在十分困难较快的病征之中理论上不存在，但在近期发病和长期存在的冠心病病征之中很难以检验到。这也许证明，与十分困难病征相比之下，这些病征自身免疫催化的缓冲增强。

以前研究证明，尽管缓冲性T细胞核(Treg)数量正常，但冠心病病征存在一些功用缺陷，其之中包括对IL-2的催化灵活性减低。此外，冠心病病征之中的振荡CD4+T细胞核也许对缓冲更具抵抗性，平庸为振荡T细胞核的消除逼近，连续性产生的Treg和形体外产生的诱导Treg，以及抗原个人经历的CD4+T细胞核之中IL-2催化逼近。本研究的目的是描绘出了CD4+缓冲性T细胞核(Treg)在一小群极较快十分困难者之中的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访星期为18-32年。

方法：BOX研究是一项以人群为基础的交叉研究，在21岁表列出确诊的病征亲戚之中检查1型号冠心病的危险因素。我们之前描绘出了长期较快十分困难者的相似性，他们保持一致多重人体内自身抗形体阴性超过10年，但并未注意到冠心病的医学疼痛，慢性或非透过性自身免疫。随后，10名继续保持一致无冠心病并愿意备有大量血液样本的较快十分困难者纳入T和B细胞核功用分析。在目前为止的研究之中，8名慢十分困难者(SP第三组)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的人体内自身抗形体阴性。所有的发起者都属于1型号冠心病十分困难的1期，尽管一些人随后失去了人体内自身抗形体对某些抗原的阴性催化，然而，一名病征已经属于2期多于6年，但并未注意到医学疼痛，一名病征被病因为冠心病，该病人72岁，在采集测试样本时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在数据分析之中对该NADP透过了单独评核。分离外周血单个核细胞核(PBMCs)，采用多参数流式细胞核法术和T细胞核消除试验评核NADP之中Treg的增益、变异和功用。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)透过无监督聚类分析，评核Treg变异。

结果：与心理健康NADP相比之下，来自慢十分困难形体的遗忘CD4+T细胞核的监督聚类辨识，激光阴的遗忘CD4+ Treg增益增高，与糖皮质激素诱导的TNFR无关蛋白(GITR)解读增高有关。一名HbA1c下降的病征与十分困难较快者和匹配的对照第三组相比之下，Treg五音有所并不相同。功用分析证明，与心理健康NADP相比之下，来自较快十分困难形体的Treg内皮细胞的CD4+振荡T细胞核消除明显受到破坏。平庸为对振荡CD4+T细胞核CD25和CD134解读的消除增高。

所示1 了解的变异分析辨识，CD4+Treg亚型号在慢十分困难队列之中增高。由FlowSOM生成的Treg楼内，聚集在来自所有NADP的光阴CD4+CD45RA -细胞核上。根据标示物解读鉴定出10个元簇:遗忘T细胞核_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T细胞核;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞核;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)用于9个并不相同Treg标示生成的10个元簇的MST。每个路由器亦然一个战略性(100个战略性)，更大的元战略性(10个元战略性)在路由器第三组周围上色。每个路由器之中的糕所示坚称单个标示的解读层次。(b)每个元聚类的热所示，以辨识整形体标示解读。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)生成所示，以及FlowSOM标记的每个元簇的表层。(e-l)相比稀土元素为每个metacluster箱内终点站所示(稀土元素> 0.05%)确定为HD和SP第三组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T细胞核(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T细胞核(l)。橙色圆点亦然ACSSP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查和。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 用于CITRUS的预测模型号证实，Treg增益的增高是十分困难较快的徽标。分级制度依赖型(a - f)和橄榄分析(g-k)比较SP发起者和匹配的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞核上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群形体的亦然性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR解读透过分离，各种类型FlowSOM群形体。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)第三组以及NADPSP 606(橙色)之中CD25+ cd127的增益汇总所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型兄集的箱内终点站所示;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读切变着色，对角突出的簇被标记为SP和HD队列之间的并不相同。(j)箱内终点站所示辨识了在SP(黑斑)和HD(灰点)第三组之中，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相比稀土元素(数目)。(k)直方所示辨识每个簇的变异(粉红色)和Treg标示相比解读与或多或少解读(蓝色);上列，缓存Treg_3;上头偷偷地，缓存Treg_4。或多或少与所有其他簇之中标示的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查和

所示3 与心理健康献血者相比之下，十分困难较快者遗忘treg的GITR增高。每个遗忘CD4+T细胞核元簇(遗忘T细胞核_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T细胞核;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞核;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个解读标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的解读热所示(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR解读串联，辨识直方所示(c)和汇总所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和检查和，p< 0.07(橙色)所有NADP包括，p< 0.05(蓝色)NADPSP 606和匹配的HD不包括在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR解读，从分级制度依赖型，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橙色)串联，辨识直方所示(e)和汇总所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检查和

所示4 来自较快十分困难的CD4+ treg细胞核操纵振荡CD4+T细胞核的灵活性减低。SP第三组用蓝色的终点站和圆点坚称，HD第三组用银色的终点站和圆点坚称，橙色的终点站/圆点坚称NADPsp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核透过分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标示为CFSE, Treg按检视的数目反应物。用抗CD3 /28微珠光阴化细胞核，培植3天后透过流式细胞核法术检验。(a-d)与CD4+这样的话者相比应的treg培植(自形体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培植。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE消除数目(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除数目。用于阴性对照(激光阴的响应细胞核则有treg)推算消除数目。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 振荡CD4+T细胞核对较快十分困难的T细胞核光阴化的消除更敏感。SP第三组用蓝色的终点站和圆点坚称，HD第三组用银色的终点站和圆点坚称，橙色的终点站/圆点坚称NADPsp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核透过分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标示，treg按检视的数目反应物。用抗CD3 /28微珠光阴化细胞核，培植3天后透过流式细胞核法术(CD25反染)和细胞核因兄分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者协同培植。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE消除次之(b)。(c,d) CD25消除次之(c)和CD134消除次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植之中的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自较快十分困难兄的光阴化遗忘CD4+Treg在GITR解读之中想得到了扩展和丰富，强调了进一步研究Treg在1型号冠心病效用个形体之中的异质性的必要性。

出处出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28